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亚博-猪瘟活疫苗的BVDV检测

作者:亚博 发布日期:2019-09-19 00:07:20 浏览次数:621

文章摘要:猪瘟(classical sw ine fever ,CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种高度接触性烈性传染病。不分猪龄、不同性别和品种均易感染, 一年四季均可发生。目前针对猪瘟的主要防控措施是疫苗免疫接种。牛病毒性腹泻病毒(bo vine viral diarrhea virus,BVDV)与CSFV均属黄病毒科、瘟病毒

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猪瘟疫苗与BVDV

猪瘟(classical sw ine fever ,CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种高度接触性烈性传染病。不分猪龄、不同性别和品种均易感染, 一年四季均可发生。目前针对猪瘟的主要防控措施是疫苗免疫接种。牛病毒性腹泻病毒(bo vine viral diarrhea virus,BVDV)与CSFV均属黄病毒科、瘟病毒属成员,BVDV不仅可以感染牛, 还可以感染猪, 引起的临床症状和病理变化与猪瘟相似。BVDV与CSFV的核苷酸同源性约为60 %, 氨基酸同源性约为85 %, 在血清学上存在交叉反应, 因而血清学方法难以区分, 用常规的病原检测方法难以对BVDV和CSFV进行鉴别检测和诊断。

多年来, 由于猪瘟兔化弱毒疫苗的广泛使用, 已经很好地控制了猪瘟在中国的大面积流行, 但在某些地区仍时有发生。一些猪场中经常发生不明原因的猪瘟免疫失败现象, 除了免疫程序、母源抗体干扰、猪瘟病毒持续感染等因素外, 还可能与猪瘟疫苗污染BVDV而导致BVDV感染有关。猪瘟细胞苗在生产过程中要用到细胞、胎牛血清等容易污染BVDV的原材料,原材料中若带有低浓度的BVDV , 就容易造成细胞苗的污染,荷兰Wensvoort 等(1988)报道由于疫苗污染引起了8起猪的BVDV感染。

由于细胞苗的大规模生产和使用,必须保证细胞苗的生产过程和最终产品的安全性和有效性;鉴于血清学诊断不能将其区分,而猪瘟疫苗中若含有BVDV病毒,接种疫苗后会引起猪只感染BVDV, 因此有必要用快速、敏感的方法来检测CSFV和BVDV。

猪瘟活疫苗(传代细胞源)成品质量控制之BVDV检测

猪瘟活疫苗(传代细胞源)的生产需要猪睾丸细胞(ST)和胎牛血清来繁殖猪瘟病毒, 如果ST或胎牛血清中含有BVDV , 则有可能将BVDV这种外源病毒带入猪瘟细胞苗中, 造成猪瘟细胞苗的污染。

RT-PCR是一种特殊的PCR形式, 该方法已经被一些国内外学者用于多种疾病混合感染的鉴别诊断。本公司根据GenBank上已发表的猪瘟病毒(CSFV)和牛病毒性腹泻病(BVDV)的全基因序列, 进行对比分析, 设计合成一对能特异性区分CSFV与BVDV的引物。经过条件优化后, 建立了检测BVDV的RT-PCR方法, 扩增片段的大小为253bp。应用该方法对生产前每批猪睾丸细胞、胎牛血清及出厂前的猪瘟细胞苗进行检测。通过试验证明, 所建立的方法具有良好的特异性和敏感性, 为防止猪瘟细胞苗的污染及进行CSFV和BVDV 鉴别诊断提供了有效方法。

本方法在RT-PCR反应中扩增出了BVDV的特异性片段, 可以特异性区分检测BVDV和CSFV病毒,由于使用了套氏PCR的方法,具有很高的灵敏度。同时经过控制试验操作的细节,反复试验验证,对PCR阳性产物进行测序,使得试验的特异性得到了保证。

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